VALIDACIÓN DE ÁCIDO ACETILSALICÍLICO Y PARACETAMOL EN PREPARADOS FARMACÉUTICOS

1. INTRODUCCIÓN:

La validación analítica consiste en comprobar que los procedimientos e instrumentos utilizados en los análisis son seguros y fiables. Si los métodos analíticos no se validaran podrían producirse valores falsos que comprometerían la calidad de los mismos.

En el desarrollo de un método de validación analítica es necesario considerar diferentes parámetros tales como la precisión (es decir, la determinación sobre múltiples muestras del mismo parámetro varias veces, comprobando la coincidencia entre sí) o la exactitud (es decir, la comparación del resultado aceptado o real de la muestra con el obtenido en el resultado analítico o con la media de un conjunto de resultados).

A continuación se hablará de diferentes métodos y materiales que se pueden utilizar en el proceso de validación de la determinación de ácido acetilsalicílico y paracetamol en preparados farmacéuticos, seguido de un ejemplo en el que se calcula la exactitud y precisión de la determinación de uno de esos analitos (paracetamol) en una muestra concreta.

2. MÉTODO PARA LA VALIDACIÓN DE ÁCIDO ACETILSALICÍLICO EN PREPARADOS FARMACÉUTICOS:

2.1. INTRODUCCIÓN:

Para realizar la determinación de un analito en una muestra se emplea un método oficial de análisis. En nuestro caso queremos determinar la presencia de ácido acetilsalicílico en preparados farmacéuticos y para ello utilizaremos un método de tipo experimental denominado Cromatografía Líquida de Alta Eficacia o High Performance Liquid Chromatography (HPLC), una técnica utilizada para separar los componentes de una mezcla basándose en diferentes tipos de interacciones químicas entre las sustancias analizadas y la columna cromatográfica.

2.2. CROMATROGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA EFICACIA (HPLC):

La HPLC es un tipo de cromatografía en columna muy utilizado en bioquímica y química analítica para la separación y análisis cuantitativo de una amplia variedad de mezclas, especialmente aquellas en las cuales sus componentes no son volátiles o son térmicamente inestables para ser separados por cromatografía de gases o en capa fina dado que esta técnica evita el contacto con el aire y la luz.

El compuesto se hace pasar por la columna cromatográfica a través de la fase estacionaria (normalmente un cilindro con pequeñas partículas con ciertas características químicas en su superficie) mediante el bombeo de un líquido (fase móvil) a alta presión a través de la columna (lo cual permite que los compuestos avancen más rápidamente a través de la columna acelerando el proceso). Los componentes de la muestra a analizar se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones con la fase estacionaria a medida que atraviesan la columna. El grado de retención de los componentes de la muestra depende de la naturaleza del compuesto, así como de la composición de la fase estacionaria y de la fase móvil.

El objetivo es la separación y determinación cuantitativa del ácido acetilsalicílico en nuestra muestra (fármaco analgésico) a través de un calibrado con patrones. Los datos cromatográficos serán procesados por un ordenador que contiene un programa de integración.

· MATERIAL:

El material de laboratorio necesario para este análisis incluye los siguientes aparatos o instrumentos:

- Cromatográfo de líquidos de alta eficacia Perkin Elmer con detector UV-visible

- Columna cromatográfica C18 de 15 cm de longitud, 4.0 mm de diámetro interno y 5 μm de tamaño de partícula.

- Filtros para disolventes de 0.40 μm.

- 8 matraces aforados de 10 mL.

- 2 matraces aforados de 100 mL.

- 1 matraz aforado de 500 mL.

- 1 matraz aforado de 1000 mL.

- Pipeta graduada de 10 mL.

- Pipeta graduada de 5 mL.

· REACTIVOS Y DISOLUCIONES:

Los reactivos que requerimos son ácido acetilsalicílico (sólido), metanol, ácido fosfórico y agua destilada. Con estos reactivos preparamos las siguientes disoluciones:

-Disolución de 500 mg/L de ácido acetilsalicílico. Para ello pesamos una cantidad adecuada del analito para preparar 100 mL de disolución y la disolvemos en metanol.

-Fase móvil: mezcla de metanol/agua/ácido fosfórico formada por 40% de metanol, 59.92% de agua y 0.08% de ácido fosfórico.

· PROCEDIMIENTO:

En primer lugar, para la obtención del calibrado, se preparan disoluciones patrón que contengan entre 20 y 100 μg/mL de aspirina en la fase móvil. Se fija la longitud de onda de detección en 254 nm y el caudal en 1.0 mL/min.

Una vez obtenidas las disoluciones del analito con la fase móvil se inyectan en el cromatógrafo de líquidos las mezclas preparadas y se registran las áreas resultantes. Con esos datos se construye una curva de calibrado en la cual enfrentamos las áreas de los picos cromatográficos con la concentración correspondiente en cada caso. Esta curva se puede representar a través de programas informáticos del tipo hoja de cálculo, donde además se calculan las ecuaciones automáticamente.

· RESULTADOS:

Finalmente, concluiremos nuestro estudio con la determinación de la concentración de ácido acetilsalicílico en la muestra de preparado farmacéutico. Para ello se inyectan 20 μl de muestra tres veces y se cuantifican los picos correspondientes a aspirina a partir de la curva de calibrado obtenida en el apartado anterior. El resultado se expresa como μg de aspirina por mL de muestra.

Necesitaremos las ecuaciones de la curva de calibrado y el cálculo de la regresión lineal o calidad de ajuste, así como también el cálculo del intervalo de confianza y precisión.

3. MÉTODO PARA LA VALIDACIÓN DE PARACETAMOL EN PREPARADOS FARMACÉUTICOS:

3.1. INTRODUCCIÓN:

La Food and Drug Administration (FDA) establece la espectrofotometría UV como método de referencia para la cuantificación de paracetamol. Esta técnica es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones químicas y biológicas. El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. La espectrofotometría UV usa haces de radiación del espectro electromagnético en el rango UV de 80 a 400 nm (principalmente de 200 a 400 nm) y en el de la luz visible de 400 a 800 nm, por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la región ultravioleta y visible del espectro.

En este trabajo vamos a validar el método conductimétrico (basado en la diferente conductividad del sistema a distintos intervalos de tiempo debido a las diferentes concentraciones de solutos) teniendo en cuenta el método de referencia para la validación de calidad del paracetamol, valorando su exactitud, rapidez, precisión… en el análisis.

3.2. MATERIALES Y MÉTODOS:

· Materia Prima:

- Paracetamol principio activo, Lote Nº0220436, origen Dinamarca.

- Comprimidos de paracetamol 500 mg, Lote Nº018, preparado por PLAMECOR.

· Reactivos:

- Soluciones estándar de NaOH 0.130N y 0.036N.

- Hidróxido de amonio concentrado (26% p/p) p.a.

· Equipos:

- Conductímetro Digital Pársec. Rango de lectura: 0,1 - 2 .105 μS. Exactitud: 0,5%.

- Celda de titulación de vidrio con encamisado p/ termostatización. Volumen útil: 150 mL.

- Agitador magnético.

- Bureta de 25 mL con llave de teflón.

- Balanza analítica.

3.3. PROCEDIMIENTO DEL MÉTODO CONDUCTIMÉTRICO:

Se estandariza el conductímetro utilizando distintas masas de la droga base llevándolas a un volumen final de 150 ml con agua destilada. Para los análisis se parte, en cada caso, de una solución homogénea preparada a partir de 1 comprimido de paracetamol en 500 ml de agua destilada. Una alícuota de 150 mL, teóricamente equivalentes a 150 mg de paracetamol, se transfiere al vaso de valoración y se adiciona un volumen dado de amoníaco. Una vez sumergidos los electrodos y la barra magnética se conecta el conductímetro. Se registra la conductancia después de cada agregado del valorante (NaOH). Graficando el volumen de NaOH (mL) con respecto a la conductancia (L, en μs) se localiza el punto final y se determina la masa de paracetamol presente en la muestra.

Como conclusiones del método conductimétrico:

- Es lineal en el rango de 50 a 300 mg de paracetamol (es decir, puede dar lugar a resultados proporcionales a la concentración del analito en la muestra).

- Su precisión y exactitud son comparables con las del método de referencia (Espectrofotométrico UV).

- Es simple y utiliza un equipo de bajo costo.

- Aplicable para el análisis de rutina de formulaciones farmacéuticas sin interferencias de los excipientes comunes.

- Es rápido y fácilmente automatizable.

4. CÁLCULO DE LA PRECISIÓN Y EXACTITUD DE LA DETERMINACIÓN DE PARACETAMOL EN COMPRIMIDOS DE 500mg MEDIANTE EL MÉTODO CONDUCTIMÉTRICO:

Tomando estos datos como referencia:

· PRECISIÓN: comparación de varianzas mediante un test F de dos colas.

Podemos aceptar con un 95% de probabilidad que las varianzas del método de referencia (espectrometría UV) y del método a evaluar (conductimetría) son comparables. Como sabemos que las varianzas son comparables y como el método de referencia es preciso afirmamos que el método a evaluar (conductimetría) también es PRECISO.

· EXACTITUD: comparación de medias.

Como las varianzas son comparables hacemos una varianza conjunta.

Podemos afirmar con un 95% de probabilidad que el método a evaluar (conductimetría) es EXACTO porque damos por hecho que el método de referencia (espectrometría UV) lo es.